Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antibacteriana in vitro de venenos e toxinas purificadas de serpentes sobre a bactéria fitopatogênica Ralstonia solanacearum. As avaliações foram realizadas em 17 venenos brutos (13 de Bothrops, 3 de Crotalus e 1 de Lachesis) e sete toxinas (1 de Bothrops e 6 de Crotalus). A atividade antibacteriana foi avaliada em meio MB1 que continha os tratamentos solubilizados (1 μL mL-1). Utilizou-se o total de 100 μL de suspensão bacteriana (8,4 x 109 UFC mL-1). Após incubação a 28°C, avaliou-se o número de colônias bacterianas às 24, 48 e 72 horas após a inoculação. O gel SDS-PAGE a 15% foi usado para analisar o perfil proteico das amostras, tendo-se utilizado 5 μg de proteína no ensaio. Além disso, os valores de concentração inibitória mínima (CIM) e concentração letal (CL50) foram determinados pelo método Probit. Os venenos e as toxinas foram capazes de reduzir mais de 90% do crescimento de R. solanacearum. Esses resultados foram ou equivalentes aos do controle positivo cloranfenicol ou até melhores. Enquanto os valores de CIM variaram de 4,0 a 271,5 μg mL-1, a CL50 variou de 28,5 μg mL-1 a 4,38 mg mL-1. Dez venenos brutos (7 de Bothrops e 3 de Crotalus) e duas toxinas (giroxina e crotamina) são abordagens promissoras para o controle da bactéria fitopatogênica R. solanacearum.

Abstract: The objective of this work was to evaluate the in vitro antibacterial activity of snake venoms and purified toxins on the phytopathogenic bacterium Ralstonia solanacearum. The evaluations were performed with 17 crude venoms (13 from Bothrops, 3 from Crotalus, and 1 from Lachesis) and seven toxins (1 from Bothrops and 6 from Crotalus). Antibacterial activity was assessed in MB1 medium containing solubilized treatments (1 μL mL-1). A total of 100 μL bacterial suspension (8.4 x 109 CFU mL-1) was used. After incubation at 28°C, the number of bacterial colonies at 24, 48, and 72 hours after inoculation was evaluated. SDS-PAGE gel at 15% was used to analyze the protein patterns of the samples, using 5 μg protein of each sample in the assay. Furthermore, the minimum inhibitory concentration (MIC) and lethal concentration (LC50) values were determined by the Probit method. Venoms and toxins were able to reduce more than 90% of R. solanacearum growth. These results were either equivalent to those of the positive control chloramphenicol or even better. While MIC values ranged from 4.0 to 271.5 μg mL-1, LC50 ranged from 28.5 μg mL-1 to 4.38 mg mL-1. Ten crude venoms (7 from Bothrops and 3 from Crotalus) and two purified toxins (gyroxin and crotamine) are promising approaches to control the phytopathogenic bacterium R. solanacearum.

RESUMO Estratégias de controle do carrapato dos bovinos, Rhipicephalus microplus, fundamentam-se na utilização de pesticidas. Os principais grupos químicos utilizados atualmente mostram-se ineficazes devido ao surgimento de populações resistentes. A pesquisa de novas moléculas com eficiência acaricida é uma necessidade para manutenção da produtividade dos rebanhos bovinos estabelecidos em regiões de clima tropical. Avaliamos a atividade de Piper tuberculatum para o controle de fêmeas ingurgitadas e larvas de R. microplus através de bioensaios de imersão de adultos e de pacotes de larvas. As concentrações avaliadas foram de 50; 25; 12,50; 6,25; 3,12 e 1,56 mg mL-1 de extrato etanólico de folha, talo e fruto de P. tuberculatum. As concentrações letais para 50% dos indivíduos (CL50) após 24 horas de exposição de larvas de R. microplus foram 3,62; 3,99 e 5,30 mg mL-1 para os extratos etanólicos de fruto, talo e folha, respectivamente. Para fêmeas ingurgitadas, a maior eficácia resultou da concentração de 50 mg mL-1 de extrato de fruto (71.57%). O principal efeito dos extratos etanólicos de P. tuberculatum foi sobre a eclodibilidade, com uma redução de 55.63% para extratos de fruto e folha. P. tuberculatum mostra-se promissora como fonte de moléculas candidatas a uso em pesticidas, em formulações destinadas ao controle das infestações de R. microplus.

ABSTRACT The strategies to control the cattle tick, Rhipicephalus microplus are based mainly on the use of synthetic pesticides. However, the emergence, establishment, and development of resistance of ticks is rendering the main chemical groups ineffective. Finding new molecules to effectively control infestations by R. microplus is necessary to maintain the productivity of cattle herds, particularly of taurine breeds established in equatorial and tropical regions of the world. Ethanol extracts from the leaves, stems, and fruits of Piper tuberculatum were evaluated in bioassays at concentrations of 50, 25, 12.50, 6.25, 3.12 and 1.56 mg mL-1. The concentrations lethal to 50% of the individuals (LC50) of tick larvae after 24 hours of exposure were 3.62, 3.99 and 5.30 mg mL-1 for fruit, stem and leaf extracts, respectively. Against the engorged females, the highest efficacy rates were obtained at the concentration of 50 mg mL-1, corresponding to 71.57%, 68.38% and 37.03% of the fruit, leaf and stem extracts, respectively. The main effect of the ethanol extracts was on the egg hatching rate of ticks, with a reduction of 55.63% for the fruit and leaf extracts, and 20.82% for the stem extract. The results show that P. tuberculatum is a promising source of molecules for use as active ingredients in pesticide formulations for R. microplus control.

O presente estudo relata novos achados de carrapatos provenientes do Município de Vilhena, Sudeste do Estado de Rondônia, na região Norte do Brasil. Carrapatos colhidos de uma capivara, Hydrochoerus hydrochaeris (Linnaeus), foram identificados como Amblyomma romitii Tonelli-Rondelli (1 fêmea) e Amblyomma sp. (1 larva). Carrapatos colhidos de uma águia harpia, Harpia harpyja (Linnaeus), foram identificados como Amblyomma cajennense (Fabricius) (16 ninfas) e Haemaphysalis juxtakochi Cooley (1 ninfa). Carrapatos colhidos de um jabuti, Chelonoidis denticulada (Linnaeus), foram identificados como Amblyomma rotundatum Koch (10 fêmeas, 2 ninfas) e Amblyomma sp. (2 larvas). O presente achado de A. romitii é o primeiro no Estado de Rondônia, representando o achado mais meridional desta espécie de carrapato, indicando que sua distribuição geográfica é mais ampla do que se supunha. Embora A. cajennense e H. juxtakochi têm sido relatados parasitando várias espécies de aves, o presente relato em harpia é o primeiro registro de carrapatos nesta espécie de hospedeiro. A. rotundatum ocorre amplamente no Estado de Rondônia e tem sido previamente relatado parasitando jabutis. Estes registros ampliam a fauna de carrapatos de Rondônia para 26 espécies.

In the present study, we provide new tick records from Vilhena Municipality, in the Southeast of the State of Rondônia, Northern Brazil. Ticks collected from a capybara, Hydrochoerus hydrochaeris (Linnaeus), were identified as Amblyomma romitii Tonelli-Rondelli (1 female), and Amblyomma sp. (1 larva). Ticks collected from a harpy eagle, Harpia harpyja (Linnaeus), were identified as Amblyomma cajennense (Fabricius) (16 nymphs) and Haemaphysalis juxtakochi Cooley (1 nymph). Ticks collected from a yellow-footed tortoise, Chelonoidis denticulada (Linnaeus), were identified as Amblyomma rotundatum Koch (10 females, 2 nymphs), and Amblyomma sp. (2 larvae). The present record of A. romitii is the first in the State of Rondônia, and represents the southernmost record for this tick species, indicating that its distribution area is much larger than currently recognized. Although both A. cajennense and H. juxtakochi have been reported parasitizing various bird species, we provide the first tick records on a harpy eagle. A. rotundatum is widespread in the State of Rondônia, and has been previously reported on the yellow-footed tortoise. The present records increase the tick fauna of Rondônia to 26 species.

O presente estudo fornece os primeiros dados epidemiológicos relativos a infecção por Anaplasma marginale em bovinos criados na Amazônia Sul Ocidental brasileira. Foi adaptado um procedimento simples para a extração de DNA a partir de coágulos sanguíneos coletados em sete microrregiões do estado de Rondônia e duas mesoregiões do estado do Acre. A técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR) foi aplicada para avaliar a freqüência da infecção por A. marginale em bovinos com idade entre 4 e 12 meses. Após a extração do DNA de cada amostra, a infecção nos bovinos foi investigada pela amplificação do gene "msp5" de A. marginale. As técnicas de amplificação do DNA revelaram que a freqüência de infecção por A. marginale foi de 98,6% (1.627/1.650) nas amostras provenientes de Rondônia e de 92,87% (208/225) nas amostras do Acre. A alta freqüência da infecção por A. marginale nos animais com idade entre 4 e 12 meses indica uma situação de estabilidade enzoótica nas regiões estudadas, as quais são comparáveis às detectadas por técnicas de imunodiagnóstico em outras regiões endêmicas no Brasil. A extração do DNA através do método aqui descrito pode ser utilizado em estudos epidemiológicos sobre a anaplasmose bovina e outros hemoparasitas.

The present study provides the first epidemiological data regarding infection by Anaplasma marginale in cattle reared in south-western Brazilian Amazonia. One simple procedure was adapted for the extraction of DNA from blood clots collected in seven microregions of Rondônia State and two mesoregions of Acre State. PCR method was used to asses the frequency of A. marginale infections in 4 to12-month-old cattle. The cattle infection was investigated by polymerase chain reaction (PCR) using the specific primer "msp5" for A. marginale. The DNA amplifications revealed that the mean frequency of A. marginale infection was 98.6% (1,627/1,650) in samples from Rondonia, and 92.87% (208/225) in samples from Acre. The high frequency of A. marginale infections in 4 to 12-month-old cattle indicate a situation of enzootic stability in the studied areas and are comparable to those detected by immunodiagnosis in different endemic regions in Brazil. The DNA extraction of clotted blood method described here can be used for epidemiological studies on anaplasmosis and other bovine hemoparasites.

Moscas hematófagas são importantes parasitas em sistemas de produção animal, especialmente em condições confinamento. Haematobia irritans, a mosca-dos-chifres, é uma das espécies que mais causam problemas em sistemas de produção de bovinos, devido ao intenso estresse que impõe aos animais. H. irritans é um dos parasitas de bovinos que determinam as maiores perdas econômicas, as quais são significativas em muitas partes do mundo, incluindo a América do Sul. No presente trabalho, populações desta espécie provenientes do Brasil, Colômbia e República Dominicana foram estudadas através da análise do DNA polimórfico amplificado ao acaso (RAPD) para avaliar basicamente a variabilidade genética entre as populações. Quinze diferentes iniciadores decamétricos aleatórios foram utilizados na amplificação do DNA genômico, produzindo 196 fragmentos nas três populações de H. irritans. Entre as amostras de H. irritans, a população proveniente da Colômbia foi a que produziu o menor número de bandas polimórficas. Esta alta genética homogeneidade pode ser atribuída à sua origem geográfica, provocada pelo grande isolamento e o baixo fluxo gênico, ao contrário das outras populações americanas, Brasil e República Dominicana. Fragmentos marcadores moleculares, que produzem bandas exclusivas, foram detectados em cada amostra, o que permitiu caracterizar a origem das populações, mas tais marcadores também são potencialmente úteis para outras abordagens, tais como a provável origem das populações brasileiras, colombianas e dominicanas na América do Sul. Índices de semelhança produzidos por análise quimiométrica revelaram uma relação mais estreita entre moscas do Brasil e da República Dominicana, enquanto que as moscas da Colômbia apresentaram a maior diferenciação genotípica em relação às outras populações.

Blood-sucking flies are important parasites in animal production systems, especially regarding confinement conditions. Haematobia irritans, the horn fly, is one of the most troublesome species within bovine production systems, due to the intense stress imposed to the animals. H. irritans is one of the parasites of cattle that cause significant economic losses in many parts of the world, including South America. In the present work, Brazilian, Colombian and Dominican Republic populations of this species were studied by Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) to assess basically genetic variability between populations. Fifteen different decamer random primers were employed in the genomic DNA amplification, yielding 196 fragments in the three H. irritans populations. Among H. irritans samples, that from Colombia produced the smallest numbers of polymorphic bands. This high genetic homogeneity may be ascribed to its geographic origin, which causes high isolation, low gene flow, unlike the other American populations, from Brazil and Dominican Republic. Molecular marker fragments, which its produced exclusive bands, detected in every sample enabled the population origin to be characterized, but they are also potentially useful for further approaches such as the putative origin of Brazilian, Colombian and Dominican Republic populations of horn fly from South America. Similarity indices produced by chemo metric analysis showed the closest relationships between flies from Brazil and Dominican Republic, while flies from Colombia showed the greatest genotypic differentiation relative to the others populations.

O presente trabalho teve como objetivo estudar a emergência de Haematobia irritans em fezes de bovinos mantidas a campo e em laboratório, além de observar a presença de outros dípteros associados às massas fecais. Foram utilizados dois grupos de fezes bovinas, um à campo e outro em laboratório, sendo cada grupo formado por cinco bolos fecais frescos de tamanho mediano (cerca de 30 cm de diâmetro), aparência opaca, cor esverdeada, presença de fina crosta externa e consistência firme. As fezes foram cobertas com gaiolas de emergência de formato piramidal, apresentando na parte superior um orifício onde foi acoplado um frasco removível; a substituição das fezes foi realizada quinzenalmente. Foram coletados um total de 355 espécimens de H. irritans, sendo 151 provenientes das gaiolas mantidas no campo e 204 em laboratório. Estas diferenças deveram-se provavelmente à menores oscilações de temperatura verificadas no laboratório do que àquelas ocorridas no campo, além da ação de artrópodes predadores, competidores e parasitóides que, provavelmente, interferiram na emergência de H. irritans nas fezes bovinas mantidas no campo. Foi observado maior número de fêmeas em comparação com machos em ambas as condições investigadas. Além de H. irritans, obteve-se outros dípteros associados às fezes bovinas, pertencentes as seguintes famílias: Aulacigastridae, Muscidae, Psychodidae, Sarcophagidae, Sepsidae, Tachinidae e Ulidiidae. Sepsidae foi a mais abundante, com 5.224 exemplares do total de 8.928 dípteros obtidos, seguida por Sarcophagidae com 2.235 espécimens coletados, Muscidae com 1.357, Aulacigastridae com 54, Psychodidae com 46, Ulidiidae com 6 e Tachinidae com 5 exemplares.

This study was carried out in order to investigate the emergence of adult flies of Haematobia irritans in cattle dung maintained in the field and in the laboratory, as well as other flies associated with dung pats. Two groups of cattle dung were used, one in the field and another in the laboratory, each group consisting of five fresh dung pats of medium size (about 30 cm in diameter), opaque appearance, presence of a thin external crust and firm consistency. The dung pats were covered with emergence cages in pyramidal format, presenting a hole in the superior part where a removable flask was coupled, and the substitution of the dung was done every 2 weeks. A total of 355 specimens of H. irritans was collected, 151 of which were obtained in the field and 204 specimens in the laboratory. These differences probably were due to smaller temperature variations in the laboratory than in the field, besides the action of arthropodal predators, competitors and parasites of horn fly pupae that probably interfered in H. irritans emergence in cattle dung under field conditions. A higher number of females were observed in both conditions. Besides H. irritans, there were collected other flies associated with bovine manure belonging to the following families: Aulacigastridae, Muscidae, Psychodidae, Sarcophagidae, Sepsidae, Tachinidae and Ulidiidae. Sepsidae was the most abundant, with 5,224 specimens of the total of 8,928 flies collected, followed by Sarcophagidae with 2,235, Muscidae with 1,357, Aulacigastridae with 54, Psychodidae with 46, Ulidiidae with 6 and Tachinidae with 5 specimens.

Realizou-se o estudo do efeito da temperatura, precipitação pluviométrica e da umidade relativa sobre a flutuação sazonal de larvas de Dermatobia hominis em 5.142 peles de bovinos. As peles foram obtidas junto a um matadouro localizado no município de Piraí, estado do Rio de Janeiro, Brasil, durante o período de novembro de 1995 a outubro de 1997. Os maiores picos de peles parasitadas por berne foram observados em novembro de 1995 e dezembro de 1996. Picos menores de infestação foram observados nos meses de março e maio de 1996 e março de 1997, quando também foram observadas altas porcentagens de peles infestadas. O aumento na porcentagem de peles parasitadas acompanhou o aumento da temperatura média mensal, sendo que temperaturas iguais ou maiores que 25ºC se mostraram benéficas ao aumento na porcentagem de peles parasitadas, assim como a precipitação pluviométrica, onde observou-se que períodos de chuvas mensais acima de 200 mm³ favoreceram ao aumento da porcentagem de peles parasitadas. As menores porcentagens de peles parasitadas por berne foram observadas durante o período de junho a outubro de 1996 e de 1997, quando verificou-se temperaturas médias mensais variando entre 21ºC e 22,5ºC, sendo que estas não se mostraram favoráveis ao aumento na porcentagem de peles parasitadas, assim como, precipitações pluviométricas mensais menores que 50 mm³. Das 5.142 peles examinadas, 2.710 (52,7%) encontravam-se parasitadas pelo berne.

The effect of temperature, rainfall and relative humidity on the seasonal fluctuation of Dermatobia hominis was investigated by counting the parasitized skins of slaughtered cattle at the abattoir of Pirai county, in the state of Rio de Janeiro, Brazil, from November 1995 to October 1997. The higher incidence of parasitized skins was observed in November 1995 and December 1996. Secondary peaks were observed in March and May 1996 and March 1997. High percentage of parasitism in skins through the summer seasons was associated with mean temperatures of 25°C and rainfall of 200 mm. The larval populations declined in both years from June to October, probably due to low temperatures at an average between 21ºC and 22.5ºC, and to low rainfall (under 50 mm). In a total of 5,142 skins checked in the 2-year study, 2,710 skins (52.7%) were parasitized with D. hominis larvae.